Abstract
Antimicrobiële peptiden (AMPs) hebben de aandacht getrokken als potentiële alternatieven voor conventionele antibiotica vanwege hun breedspectrumactiviteit tegen multiresistente ziekteverwekkers. Dit project bouwt voort op een lopende in silico optimalisatiestrategie, die als doel heeft om verkorte peptidefragmenten met een verbeterd drugprofiel te verkrijgen uit AMPs van de zwarte soldaatvlieg. De in silico benadering maakt de constructie en evaluatie van een grote collectie korte peptiden mogelijk, waarbij de beste AMP-kandidaten geselecteerd worden voor verdere experimenten. De geselecteerde AMP's zullen worden gesynthetiseerd met behulp van "solid-phase" peptidesynthese (SPPS), gezuiverd tot een hoge zuiverheid en gevriesdroogd voor verdere testen. De antibacteriële activiteit van de peptiden zal worden geëvalueerd tegen klinisch relevante stammen, waaronder E. coli, P. aeruginosa en S. aureus met behulp van een gestandaardiseerde high-throughput screening om hun minimale inhiberende concentratie (MIC), IC50 en minimale bactericide concentratie (MBC) te bepalen. Om het therapeutisch potentieel te beoordelen, zullen cytotoxiciteitsstudies worden uitgevoerd op menselijke longfibroblasten en erytrocyten om selectiviteit te garanderen. Stabiliteitsanalyses zullen de weerstand van de peptiden tegen zout- en pH-schommelingen, stabiliteit in longvocht en serum, en proteolytische afbraak bepalen. Het werkingsmechanisme zal worden onderzocht met behulp van een op propidiumjodide (PI) gebaseerde fluorescentietest om membraanpermeabilisatie in realtime te volgen, terwijl elektronenmicroscopie (SEM) hogeresolutiebeelden zal opleveren van de verstoring van het bacteriële membraan. Deze allesomvattende aanpak is gericht op het leveren van AMPs met een verbeterde werkzaamheid, stabiliteit en veiligheid, die kunnen dienen als een sterke basis voor verdere medicijnontwikkelingsprojecten.
Onderzoeker(s)
Onderzoeksgroep(en)
Project type(s)